广州LncRNA_文奇生物,让孩子天赋多一点

RNA甲基化丨m6A或将成为治疗不育症的新靶点!

 

RNA甲基化丨m6A或将成为治疗不育症的新靶点!

 

m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰,在细胞加速mRNA代谢和翻译以及在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中,占到了 RNA甲基化修饰的80%。

 

这一次,为大家分享一篇文章,关于探索发现m6A修饰调节睾丸间质细胞发育的过程,印证了m6A修饰在“人类繁衍”中也发挥着重大意义,该方向的发现将会吸引更多的科研工作者探究m6A与“不孕不育”的密切联系。

 

影响因子:11.059实验方法:MeRIP-seq, RNA-seq,CoIP, ChIP, RIP, MeRIP-qPCR等

 

文章内容

 

该研究中作者检测了LCs自噬标记物LC3B-II,发现LCs中LC3B-II在细胞分化过程中表达增加,并且在成年人的LCs中达到峰值。此外LC3B-II在LCs从茎细胞向成体细胞分化过程中表达量增加,同时血清睾酮水平逐渐升高。进一步研究发现沉默ATG7后抑制HsCG诱导LC3B-II表达和睾酮分泌,表明LCs自噬介导睾酮合成。

 

2.LCs的自噬依赖于AMPK信号通路

 

3.CAMKK2/PPM1A参与PRKAA2 Thr172磷酸化过程

 

4. LCs中的睾酮合成受m6A mRNA修饰调控

 

5.m6A甲基化影响Camkk2 RNA的稳定性

 

6. m6A甲基化促进Ppm1a的翻译

 

7. HsCG对METTL14/ALKBH5的影响

 

总结:

 

文奇生物RNA修饰特色

 

文奇生物RNA修饰高通量测序提供针对单个分子的m6A测序(包括编码mRNA和非编码lncRNA,circRNA,microRNA等),也提供一次检测多种RNA分子m6A修饰的全转录组测序。

 

文奇生物提供比色法检测整体m6A修饰水平、RNA修饰测序、MeRIP-qPCR验证、RIP和RNA pull-down机制等研究服务。特殊样本如血清,血浆,外泌体和石蜡等也可进行RNA修饰测序。

 

利用m6A特异性抗体,通过免疫共沉淀技术(MeRIP方法)特异性富集发生甲基化修饰的RNA,与不处理组(Input)做对比,对m6A修饰进行高通量测序和peak峰定位。 

 

 

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同位素相对标记与绝对定量技术 

 

背景知识:

 

新泽西医学及牙科大学的蛋白组学研究中心主任Hong Li说:“当我们开始蛋白组学研究时,就采用2D凝胶技术,但得出的信息量却让大伙很失望,因为许多蛋白质已经改变了自身的代谢过程。”而基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法,不需要凝胶,就可以获得相对和绝对定量的蛋白质结果。定量蛋白组学是蛋白质组学的一个重要组成部分,即对一对基因组表达的全体蛋白或复杂的混合物体系中所有蛋白质进行定量和鉴定。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)是美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)2004年新开发的一项蛋白定量技术。iTRAQ技术是一种新的、功能强大的可同时对8种样品进行绝对和相对定量研究的方法。

 

技术原理:

 

iTRAQ标记试剂可以与肽段的N端或赖氨酸侧链发生反应,从而完成对肽段的标记。标记完成后混合一个实验组的所有样本,一次可同时处理多达8个不同处理的样本。

 

在进行一级质谱进行母离子选择时,来源于不同标记样本的同一个肽段表现为一个峰,相当于一级质谱强度增强了8倍,有利于鉴定。

 

在进行二级质谱时,iTRAQ试剂在图一所示虚线位置断裂,Balance group发生中性丢失。Reporter group的强度可反映肽段的相对丰度。

 

Peptide Reactive Group是与肽段结合的基团

 

Reporter group 是报告基团,其质量从113-121,(不包括120,因为120和苯丙氨酸的亚胺离子质量一样)

 

Balance group是平衡基团,其作用是平衡报告基团的质量差,使iTRAQ试剂整体质量相同。

 

主要应用:

 

iTRAQ技术应用非常广泛,它是通过200年开发的一种新的同位素标记试剂iTRAQ,结合LC/MS技术已被广泛地应用于细菌、酵母、人体组织、细胞和体液等多种样本的蛋白质鉴定和定量。作为一种新的定量蛋白质组学研究方法,该技术可同时对4种样本进行定量分析并展现高通量、重复性好、敏感性高等特点。iTRAQ技术还可以为我们研究前列腺癌的发生、进展机制,发现新的生物学标记物提供有力的技术平台。iTRAQ技术还可以应用与比较野生型酵母菌株和两种同源突变型酵母菌株xmlv、upflv蛋白质表达差异。同时它可以对多种蛋白混合物或重组的蛋白混合物进行精确地定量。

 

您只需提供:

 

新鲜且足量的样品(组织不少于500 mg,细胞不少于107),或提取的总蛋白(≥ 200 μl)。若提供总蛋白,需满足iTRAQ质检要求

 

我们提供:

 

差异蛋白信息,生物信息学分析结果,完完整的iTRAQ实验报告单等。

 

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