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免疫印迹技术

 

背景知识 ：

 

蛋白质印迹的发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为Western Blot。蛋白免疫印迹（ Western Blot） 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

 

技术原理：

 

与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

 

样品准备条件：

 

细胞样品：收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80 °C冰箱保存。

 

组织样品：动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存，液氮冻存24 h后可转入-80 °C冰箱保存。

 

所有样品的处理和保存过程中，切忌反复冻融。

 

样品运输条件：样品运输条件根据实验样品的处理条件，可以选择液氮或者干冰运输。 

 

您只需提供：

 

新鲜且足量的样品（组织不少于50 mg，细胞不少于106），或提取的总蛋白（≥ 50 μl），检测蛋白信息，一抗（包括抗体说明书）（若无一抗，可有偿使用公司备存抗体或代购）等。

 

我们提供：

 

实验结果原始胶片，电子版图片，目的条带光密度值，完成实验报告单等。

 

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